Руководитель эксперимента
Профессор РАЕ, почетный доктор наук, к.б.н. МГУ Прохоров Л.Ю.Методы исследования
Чашки с нематодами для облучения располагаются на поверхности диссимметратора. Чашки Петри пластмассовые диаметром 35 мм с 3-мя вставками из ПВХ колец, диаметром 14 мм. В каждое кольцо заливается агаровая подложка, закладывается питание для нематод и помещается по 1-3 нематоды.
Для эксперимента сформировали две группы чашек: 1) контроль; 2) чашки, стоящие на диссимметраторе. Контрольные чашки ставили на расстоянии 3.5 м от диссимметратора. Облучение диссимметратором составляло от 1 до 5 ч в сутки, в среднем 2.9 ч/сут. Каждая группа состояла из 7 чашек по 38 нематод в группе. Предварительно сформирована одна линия нематод для посева взрослых одиночных нематод в чашки Петри с кольцами. Возраст нематод на начало действия диссимметратора 6 сут.
Первоначальный высев нематод производили из подготовленного пула нематод с определенной продолжительностью жизни 5 суток по 1-3 нематоды в одно кольцо. Для обеспечения более пологой кривой выживания и лучшего выявления особенностей действия того или иного фактора на жизненные характеристики нематод, чаши с посевами нематод помещали перед началом эксперимента в холодильник на несколько часов при температуре 5 - 7 градусов.
Для эксперимента чашки извлекали из холодильника, 7 опытных чашек ставили на диссимметратор (Рис. 2), а контрольные 7 чашек размещали на расстоянии 3.5 м от него.
После проведения облучения опытных чашек, обе группы чашек помещали обратно в холодильник при 5-7С. Далее ежедневно чашки вынимали из холодильника, переносили в стерильный ламинарный шкаф, где с помощью микроскопа производили подсчет оставшихся живых нематод и добавление, при необходимости, воды для предотвращения высыхания агаровой подложки. Опытные чашки ставили на диссимметратор, а контрольные – на расстоянии 3.5 м от него. После завершения облучения те и другие чашки возвращали обратно в холодильник при температуре 5-7С.
В течение эксперимента подбирали время облучения нематод диссимметратором от 1 до 5 ч, чтобы установить оптимальную величину и максимально допустимое значение. Определили, что 5 часов не является токсическим временем и не ухудшает жизнеспособность нематод. Определили оптимальное время 3 часа. Фактическое среднее облучение составило 2.9 ч/сут.
Результаты
Результаты приведены на рисунках 1 и 2, а также в таблицах 1 и 2. На рис. 1 видно, что кривая выживаемости нематод при облучении их диссимметратором Кутушова М.В. лежит выше, чем кривая выживаемости контрольных нематод, не подвергшихся такому же облучению.
В нескольких точках кривой на 10, 13, 14 и 15 сутки число живых нематод под действием диссимметратора достоверно выше, чем в контроле. Это говорит о повышении выживаемости нематод при действии диссимметратора Кутушова.
Средняя продолжительность жизни (СПЖ) нематод под действием диссимметратора составляет 13.5 сут, что достоверно выше, чем в контроле (11.3 сут) на 2.2 сут или на 19.3% при уровне значимости р=0.002, а максимальная продолжительность жизни (МПЖ) – больше на 17.6% (С диссимметратором – 20 сут, в контроле – 17 сут).
Отличие определяли по формуле: Δ = ((СПЖД ̶ СПЖК)/СПЖК) х 100%, где СПЖД и СПЖК – средняя продолжительность нематод при действии диссимметратора и в контроле, соответственно. Аналогично вычисляли отличие МПЖ.
Обнаружено постепенное увеличение разницы между числом нематод в группе при облучении диссимметратором с числом нематод в группе без обработки, с увеличением времени их жизни (Табл. 2). Отличие определяли по формуле: Δ = ((NД ̶ NК)/NК) х 100%, где NД и NК – число нематод при действии диссимметратора и в контроле, соответственно, в конкретные сутки жизни. Достоверность отличия числа нематод в данные сутки рассчитывали между группами чашек, при этом учитывали число нематод в каждой чашке. Выявлено достоверное отличие в нескольких сутках жизни нематод (Табл. 2).
Выводы
1. Диссимметратор Кутушова М.В. не оказывает вредного воздействия на нематоды при однократном непрерывном облучении за время не менее 5 часов.
2. Повышается выживаемость нематод при периодическом ежесуточном действии диссимметратора Кутушова М.В. от 1 до 5 ч в сутки.
3. За время облучения диссимметратором нематод в среднем 2.9 ч/сут средняя продолжительность жизни достоверно увеличилась на 19.3%, а максимальная продолжительность жизни возросла на 17.6%.
4. В нескольких точках кривой выживания на 10, 13, 14 и 15 сутки число живых нематод под действием диссимметратора достоверно выше, чем в контроле.
5. В течение жизни происходит постепенное увеличение разницы между числом живых нематод в группе при облучении диссимметратором с числом нематод в группе без обработки от 2.8% до 400% и более в конкретные сутки.
6. Предварительные результаты показывают положительное действие диссимметратора на жизнеспособность взрослых нематод, в результате которого возможно увеличение их средней и максимальной продолжительностями жизни.
7. В связи с проведением только одного эксперимента желательно проведение дополнительно еще двух экспериментов для получения более достоверного результата.